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(更正一下:之前的流速设置有问题,现改为30毫升每分钟,而不是1毫升每分钟,实验室采用的是高压液相色谱。)
几分钟后,流动相运行平稳,进出硅胶柱的细管中充满了液体,不再存在气泡。
目前样品柱中的样品岿然不动,并没有在溶剂的裹挟下向下移动,这是因为当前的溶剂为纯石油醚,极性非常小。
许秋打开紫外检测器,设置5分钟后A:B的体积比为90:10,也就是缓慢增大流动相的极性。
流动相的极性不能贸然的迅速提升,因为仪器只能控制当下抽取溶剂的比例。
换言之,仪器对流动相溶剂比例的控制是滞后的,硅胶柱中实际流动相的溶剂比例可能是十几秒、几十秒前的比例。
而液相色谱分离、提纯的原理,主要是利用不同分子结构的物质,在色谱柱中移动所需的溶剂极性的临界值不同。
也就是说,一旦流动相的极性过高,同时达到多种组分的临界值,导致这些组分没有被彻底分开,同时随着流动相向下移动,再同时被收集,就意味着实验失败。
那么就要重新拌样、旋蒸、填柱子、过柱子了。
这台液相色谱仪同时只能处理一根柱子,所以许秋在操作的时候,韩嘉莹去把另外两个样品填入小样品柱,完成装样。
之后她没事可做,便搬了个圆凳坐在他旁边围观。
随着时间的推移,A、B溶剂中B的体积分数缓慢提升。
“师兄,还没反应啊,二氯甲烷都20%多了,还一动不动的。”
“这说明极性还是不到位,慢慢升吧。”
“感觉过柱子好费溶液呀。”看着旁边溶剂桶的液面已经微微下降,韩嘉莹吐槽了一句。
“是啊,而且是带有反应产物的混合溶剂,想重复利用也比较麻烦,最多用来洗一洗瓶子,”许秋笑了笑,“不过二氯甲烷和石油醚,每种都订了四桶?乙酸乙酯订了两桶?肯定是够用了一段时间了。”
又过了一会儿,当软件上实时显示着当前B%为32%时?空白硅胶柱中终于出现了一抹红色?紫外检测器中也出现了明显的信号。
“动了,它动了。”
“嗯?准备干活。”许秋将B%维持在30%。
硅胶柱中,那一抹红色慢慢的变为一团红色?接着又变为一条红色。
当红色的头部到达空白色谱柱的下端后?许秋将收集模式从废液模式改为工作模式。
淡红色的溶液随着一根针头喷射入试管架上的1号试管中。
十几秒后,1号试管装满,针头自动移动至2号试管的位置,继续喷射……
许秋也没闲着?他用毛细管蘸取了少量1号试管中的溶液?然后用石油醚:二氯甲烷1:1配比进行点板。
他对比了此次点板的结果和上午的结果。“只有一个样品点,而且还很浅,从位置来看,是那个主要产物的。”
韩嘉莹则指了指上方的针头。“这边溶液喷的好快,感觉没过多长时间?一跟试管就装满了。”
“我们用的是高压液相色谱,流速是30毫升每分钟?换算一下,一个试管的容积大约10毫升?差不多一分钟四管左右吧,而普通的液相色谱通常仅为1毫升每分钟?效率差了几十倍。”许秋笑了笑道:
“现在的压力只有30多个大气压?这台仪器的最大承载压力可达100大气压?对应的极限流速大概在60毫升每分钟。”
“差距这么夸张呀,”韩嘉莹疑惑道:“那这样的话,不会降低分离效果吗?”
“因为我们只有两个样品点,而且它们的分离程度比较高,所以并不用担心这个问题。”许秋解释道:“之后如果涉及比较难以分离的样品,可以适当的降低流速,提高分离效果。”
……
随着溶液继续喷射,后面试管中液体的颜色也越来越红。
第一次实操,许秋比较谨慎,每隔五个试管点一次板,判断试管中的组分是否纯净。
幸运的是,均只有一个样品点,而且在硅胶板上的爬升位置也都一致,表明是同一种产物。
二十多分钟后。
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